2017/8/28 23:34:45 2015/8/31 2:51:37 2015/8/31 1:28:06 2015/8/31 0:18:41 2015/8/30 17:29:24 TM vector system构建携带人SMOC1基因的重组腺病毒表达载体,并感染人主动脉瓣间质细胞并检测外源性SMOC1在细胞中的表达。方法：用PCR的方法扩增SMOC1基因,将其克隆到pGEM-T Easy载体中并测序鉴定。经Not I和Xho I双酶切后接入pShuttle—CMV穿梭载体,构建重组腺病毒的穿梭质粒pShuttle—CMV—SMOC1。将经Pme I线性化的pShuttle-CMV穿梭载体与pAdEasy_TM DNA电穿孔共转化BJ5183重组细菌,获取重组腺病毒质粒pAdEasy-SMOC1,再将经Pac I线性化的重组病毒骨架质粒转染HEK293A包装细胞,包装并扩增重组腺病毒(Ad-SMOC1)。用Ad-SMOC1感染人主动脉瓣间质细胞,以Western blot法和免疫荧光染色法检测SMOC1在hAVICs中的表达。结果：成功构建并包装表达SMOC1蛋白的重组腺病毒,该重组腺病毒在体外能有效感染人主动脉瓣间质细胞并高表达SMOC1蛋白,且其介导表达的SMOC1蛋白主要定位于hAVICs的胞浆和胞膜上。 结论：成功地构建了携带人SMOC1基因的重组腺病毒,为研究SMOC1在瓣膜间质细胞中的作用奠定了实验基础。]]>